Методы выделения белков

Для подробного исследования физико-химических и биологических свойств белков, химического состава и строения необходимым условием является получение индивидуальных белков в высокоочищенном, гомогенном виде. Для этого обычно биологический материал измельчают (гомогенизируют), белки извлекают (экстрагируют), разделяют (фракционируют).

Гомогенизация. Существуют различные измельчители гомогенизаторы (ножевые, пестиковые), шаровые мельницы; методы замораживания и оттаивания (попеременное) – для получения вирусных белков; разрушение ультразвуком, пресс-методы (пропускание замороженного материала через мелкие отверстия под давлением) и т.д.

Экстракция белков. Для экстракции белков применяются различные буферные смеси с определенными значениями рН среды, органические растворители, неионные детергенты – вещества, нарушающие гидрофобные взаимодействия между белками и липидами и между белковыми молекулами.

Широко используются глицерин, растворы сахарозы, буферные смеси – фосфатные, цитратные, боратные со значениями рН от слабощелочных до кислых, которые способствуют как растворению, так и стабилизации белков. Широко применяется трис-буфер (например, 0,2 M раствор трис (оксиметил) аминометана с 0,1 M раствором HCl в разных соотношениях). Для выделения белков сыворотки крови применяют методы осаждения этиловым спиртом (получение гамма-глобулина), ацетоном, бутиловым спиртом и т.д.

Широко применяется осаждение сульфатом аммония (NH₄)₂SО₄ – для выделения альбуминов и глобулинов.

Для разрыва белково-липидных связей применяют различные детергенты (для отделения от мембран) – тритон Х-100. додецилсульфат натрия, дезоксихолат натрия и т.д.