17. Значение хроматографии. Классификация и назначение методик хроматографического анализа. Основные направления использования хроматографии в почвенных исследованиях.

В хроматографические методы анализа входят методы газовой, газо-жидкостной, жидкостной, распределительной, тонкослойной, ионообменной хром-фии. Эти методы разделения в-в основаны на многократном распределении хроматографируемого в-ва между 2-мя фазами, одна из которых остается неподвижной. Это одновременно методы разделения и определения. 1. Хроматографирование на крахмале. Картоф. пищ. крахмал промывают путем декантации и переносят на воронку. Для гуминовых и фульвокислот берется бюретка на 30 см³ с диаметром 1 см. Веред заполнением бюретки в низ вкладывают ватный тампон-1 см., заполняют бюретку и через 30-40 мин. жидкость стекает и трубка д.б. заполнена полностью. Через 18-20 ч колонка готова к исп-ю. Кислоты вносят в колонку в виде щелочных р-ров-гуматов или фульватов. Для этого препараты гумм. и фульвок-т раст-т в 0,2 Н бикарбонате натрия и доводят рН до 10-11, осторожно прибавляя NaOH. Конц-я гумм. к-т д.б. 1,5-2 г/литр, а фульвок-т-10 г/л. На верх. часть колонки наносят 0,3 мл р-ра к-т. Образование зон заканчивается примерно через 1,5-2 ч. При хром-нии гумм. к-т образуется 2 или 3 зоны, верхняя имеет бурый или темно-бур. цвет., нижняя-светло-бурый. В УФ свете верх. зона флюорисцирует желто-палевым цветом. Фульвок-ты обр-т 2 зоны, их делят по тому, что верх. зона флюорисцирует желтым цветом. Эти зоны можно извлеч, пропуская воду. 2. Хром-ние на окиси алюминия. Окись алюминия промывают дист. водой и неск. раз промывают на воронке бюхнера. Высушивают при 105 °С и прокаливают в муф. печи при красном калении. Затем к окиси алюминия добавляют дист. воду до образования густой суспензии и заполняют бюретку. После стекания жидкости на пов-ть наносят 0,5-1 мл раствора гумусовых веществ. Образование зон проявляется через 10-15 мин. Гумм. и фульвок-ты образуют 2 зоны: верхняя-бурая, в УФ свете-желтая, вторая зона-светло бурая, в УФ свете-желтая. Эти зоны по Кононовой выделить не удается. Япон.уч. Хаяси предложил разделить эти зоны с пом.2% р-ра NaOH и в этом случае ниж. зона имеет желто-бурый, а верхняя-бурый цвет. 3. Хроматографирование на бумаге. Берут 0,2 г сух. препарата гумм. или фульвок-т, их растворяют в 10 мл 0,2 Н NaOH и уст-ют рН 8,1-8,3. Хром-ние проводят на медленнофильтрующей бумаге марки М. Для этого из бумаги вырезают круг диаметром 10-12 см. В центр наносят щелочной р-р объемом около 0,015 мл микропипеткой. Затем р-р подсушивают на воздухе. От края к центру вырезают узкую полоску-фитилек, который укорачивают и загибают перпендикулярно плоскости круга. Затем в открытую чашку Петри диам. 9 см наливают растворитель и погружают в него фитилек. Затем чашку помещают в чашку большего диаметра и закрывают крышкой. Растворителем служит смесь n-бутилового спирта, ледяной уксусной кислоты и воды в соотношении 10:3:7 с рН около 5,2. Хроматографирование продолжают 4-5 ч. Затем хроматографируемое вещество подсушивают на воздухе и обнаруживают 2 зоны, видимые на свете. 1-в центре (бурая), 2-по краям (светло-бурая).