Глава 2.Организация и методы исследования

В эксперименте участвовали 16 женщины,которые были поделены на 2 группы.Каждая группа занималась по разной тренеровочной программе.Одна группа выполняла силовые упражнения с перерывами 2-3 минуты с увеличением нагрузки,другая группа без перерыва увеличивая нагрузку работала до отказа.

Разделение по группам проходило с учитыванием хронических заболеваний испытуемых и их изначальной физической подготовки.

Женщины посещали тренажерный зал 3 раза в неделю.

У испытуемых проводился забор крови из локтевой вены в покое и после одночасовой физической нагрузки. Забор крови проводился каждые 2 недели (контрольные точки) в течении 2,5 месяцев.

Далее проводился биохимический анализ крови.

Методика определения общего холестерина в плазме крови

Принцип метода:При гидролизе холестерина холестеролэстеразой образуется свободный холестерин.Образовавшийся и имеющийся в проье холестерин окисляется кислородом воздуха под действием холестеролоксидазы с образованием эквимолярного количества перекиси водорода.Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта.Интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина в пробе.

Исследуемый материал:плазма крови.

Анализ:Опытную пробу составляет 0,02мл плазмы, 2,0мл реагента.

Калибровочная проба-2,0мл реагента,0,02мл раствор холестерина.

Контрольная проба-2,0мл реагента, 0,02мл вода.

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 5 минут при комнатной температуре(20-25С) или при температуре 37 С и измеряют оптическую плотность опытной и калибровочной проб против контрольной пробы в кюветах с толщиной поглощающего слоя 5 мм при длине волны 500 нм

(ФЭК-490 нм).Окраска стабильна не менее 2 часов после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.

Расчет концентрации холестерина проводят по формуле:

С=Е₀/Е_ст*5,17[ммоль/л] или С=Е₀/Е_ст*200[мг/100мл]

Е₀ и Е_ст-экстинции образца и стандарта,относительно контрольной пробы.

Содержание холестерина:идеальное содержание<5,2ммоль/л

допустимое содержание 5,2-6,5ммоль/л

патологическое содержание>6,5ммоль/л

Методика определения триглицеридов в плазме крови

Принцип метода:

Триглицериды=^липаза=глицерин+жирные кислоты

Глицерин+АТФ=^{глицерокиназа}=глицерил-3-фосфат+АДФ

глицерил-3-фосфат+О₂=^гфо=диоксиацетон фосфат+2Н₂О₂

Н₂О₂+4-ААР+4-хлорфенол=^{пероксидаза}=хинонимин+4Н₂О

Концентрация хинонимина,определяемая фотометрически,пропорциональна концентрации триглицеридов в пробе.

Анализ:Опытную пробу составляет 0,02мл плазмы, 2,0мл реагента.

Калибровочная проба-2,0мл реагента,0,02мл калибратор.

Контрольная проба-2,0мл реагента, 0,02мл вода.

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 10 минут при комнатной температуре или 5 минут при 37 С,и измеряют оптическую плотность опытной и калибровочной проб против контрольной пробы в кюветах с толщиной поглощающего слоя 5 мм при длине волны 500 нм (ФЭК-490 нм).

Расчет концентрации триглицеридов:

С=(Е_о/Е_кал*250)-10[мг/100мл] или С=(Е_о/Е_кал*2,85)-0,11 ммоль/л

Е_о и Е_кал -экстинции опытной и калибровочной проб,измеренные относительно контрольной пробы.

Норма:13-160мг/100мл(0,14-1,82ммоль/л)

Группа риска:160-200мг/100мл(1,82-2,29ммоль/л)

Патологические показатели:выше 200мг/100мл(более 2,29ммоль/л)

Методика определения общих липидов в плазме крови

Принцип метода:ненасыщенные липиды и жирные кислоты,фосфолипиды и холестерин взаимодействуют после гидролиза серной кислотой с фофованилиновым реактивом с образованием красного окрашивания.

Анализ:проба-0,02мл плазмы, 1,50мл концентрированной серной кислоты.

Стандарт-0,02мл реактив 1, 1,50мл концентрированной серной кислоты.

Контроль-1,50мл концентрированной серной кислоты.

Перемешать и нагреть 15 минут на кипящей водяной бане.Охладить холодной водой и отмерить(мл)

проба стандарт контроль

гидролизат 0,10 0,10 0,10

реактив 2 1,50 1,50 1,50

Перемешать,оставить стоять 50 минут при комнатной температуре.Не позднее чем через 60 минут измерить оптическую плотность пробы(А1) и стандарта(А2) против контроля в кювете 1 см при длине волны 540нм.

Расчет:общие липиды(г/л)=8*А1/А2

Норма:4-8г/л