1.4.17 Способы проведения тсх
Подготовка пробы является очень ответственной операцией в ТСХ. Размывание в ТСХ в первую очередь связано с качеством нанесения стартовой зоны образца.
Выбор растворителя и способы нанесения пробы
К растворителю, из которого пробу наносят на слой сорбента, предъявляют следующие требования: полная растворимость в нем всех компонентов пробы; относительная летучесть (для быстрого удаления с пластины перед началом разделения); низкое значение Rf (при использовании полярных растворителей, в которых Rf разделяемых веществ близко к 1, пробы хроматографируются непосредственно при нанесении, что искажает форму стартового пятна и может влиять на Rf, особенно при ТСХ в менее полярных элюентах); хорошая смачиваемость слоя (важно для ОФТСХ).
Стартовая зона должна быть по возможности минимальной, в особенности для ВЭТСХ. Слишком высокая концентрация вещества в стартовом пятне может замедлить растворение пробы при элюировании.
Для нанесения проб используют стеклянные платино-иридиевые капилляры, микропипетки, шприцы, а также специальные дозирующие устройства, например, платино-иридиевые капилляры с максимальным объемом дозирования 22 нл на 1 м длины. При отборе одной и той же пробы капилляром воспроизводимость введения пробы составляет ±0,7% от ее объема.
При нанесении вязких проб можно нагревать пластины или подсушивать их феном для непрерывного испарения растворителя. Использование двухфазных пластин с предадсорбционным слоем снимает многие проблемы. На границе двух сорбентов зона сжимается в виде узкой полосы независимо от качества нанесения стартового пятна (рис. 2).
Рис. 2. ТСХ смеси красителей на двухфазных пластинах с предадсорбционным слоем.
Рис. 3. Последовательность операций при нанесении образца контактным способом
Пробу можно сконцентрировать в узкую стартовую зону при погружении пластины в растворитель, для которого значения Rf всех компонентов близки к 1, и пропусканием его несколько выше зоны нанесения пробы, после чего элюирование прекращают, а пластину быстро высушивают. Подобную операцию повторяют несколько раз. Для вязких и разбавленных проб эффективен способ контактного нанесения. На рис. 3 показана последовательность операций нанесения пробы по этому методу:
а) над отверстием в металлической пластине помещают смоченную перфторкосином этиленпропиленовую пленку, которая не смачивается никакими растворителями;
б) с помощью вакуумирования пленка плотно прижимается к пластине и слегка втягивается в отверстие, образуя углубление;
в) в углубление вносят пробу, которая остается там в виде шарообразной капли, так как не смачивает пленку;
г) растворитель испаряют, подсушивая сверху феном, пока шарик не уменьшится до нужного размера;
д) пластину помещают слоем вниз на пленку над пробой и, заменяя вакуум легким давлением, переносят на нее пробу.
Этот метод позволяет нанести на пластину одновременно несколько образцов без их предварительного растворения и концентрировать разбавленные пробы.
Существенным является постоянство расстояния линии нанесения проб от нижнего края пластины и линии погружения пластины в элюент.
Способы проведения тсх
Линейная, круговая и антикруговая ТСХ. В колоночной жидкостной хроматографии возможно только линейное движение элюента. В ТСХ благодаря открытому слою сорбента можно осуществить три типа элюирования: линейное, круговое и антикруговое (рис. 4). Кроме того, в ТСХ можно реализовать дополнительно различные методики, позволяющие значительно увеличивать пиковую емкость.
Наиболее широко используют линейное развитие хроматограмм. Пробы наносят на стартовую линию параллельно одной из сторон пластины. Пластину помещают вертикально в хромато-графическую камеру, на дно которой налит элюент, и проводят восходящую ТСХ. В линейной ТСХ с увеличением Rf, вещества размывание увеличивается. Линейное развитие хроматограмм можно осуществить и при горизонтальном положении пластины
Рис. 4. Типы элюирования в ТСХ: а - линейное; б - линейное (горизонтальное); в - круговое; г - антикруговое с подачей на нее элюента с одной или с обеих сторон.
Для восходящей линейной ТСХ в качестве хроматографической камеры можно использовать любой сосуд прямоугольной или цилиндрической формы. Однако в таких камерах трудно получить воспроизводимые результаты, так как по мере поднятия элюента по пластине происходят фронтальное разделение элюента в слое сорбента (полизональная ТСХ), адсорбция и капиллярная конденсация компонентов элюента из паровой фазы на сухую часть пластины и другие процессы. В подобных камерах, можно проводить ТСХ с насыщением (стенки камеры покрывают фильтровальной бумагой, смоченной элюентом) или без насыщения.
Для уменьшения влияния паровой фазы в линейной ТСХ используют «сэндвич»-пластины. С трех сторон двух пластин снимают узкий слой сорбента и, проложив между ними прокладку (толщина 0,5--2 мм), плотно скрепляют такой «сэндвич»-зажимом и опускают в камеру с элюентом. ТСХ проводят, таким образом, одновременно на двух пластинах, расположенных слоем друг к другу. В качестве второй пластины можно использовать, стеклянную подложку без слоя адсорбента.
В круговой ТСХ пробы наносят на некотором расстоянии от центра пластины по окружности, а элюент подают в центр (рис. 4, б). Оптимальное разрешение достигается круговой хроматографией при К = 100 (Rf = 0,009), т. е. хорошо разделяются вещества с низкими значениями Rf.
В антикруговой ТСХ пробы наносят по окружности по периферии пластины и элюент подают в направлении к центру пластины (рис. 4, г). При этом хроматографические зоны сжимаются по мере движения по пластине. В антикруговой ТСХ одновременно можно анализировать наибольшее количество проб. Это наиболее быстрый метод ТСХ. Антикруговая ТСХ дает хорошие результаты при разделении веществ с высокими значениями Rf. Для реализации круговой и антикруговой ТСХ фирма «Камаг» выпускает специальные так называемые U-камеры. Применение U-камер позволяет повысить воспроизводимость результатов ТСХ за счет элиминирования влияния паровой фазы и возможности проведения ТСХ в атмосфере инертного газа. Кроме того, имеется возможность наносить пробу в поток элюента. Круговую и антикруговую ТСХ можно реализовать и более простым способом при использовании, например, чашки Петри для круговой ТСХ и 2 чашек Петри, вставленных одна в другую для антикруговой ТСХ. Для увеличения пиковой емкости в ТСХ используют методы проточной, многократной, градиентной и двумерной ТСХ. [1]
- Введение
- Глава 1. Физико-химические основы тонкослойной хроматографии
- 1.1 Классификация хроматографических методов анализа
- 1.2 Основы метода ТСХ
- 1.3 Распределительная хроматография на бумаге
- 1.4 Тонкослойная хроматография
- 1.4.1 Сорбенты
- 1.4.2 Растворители
- Подбор подвижной фазы (системы) проводится по следующим правилам:
- 1.4.3 Подготовка пластин
- 1.4.4 Техника нанесения исследуемых растворов
- 1.4.4 Хроматографирование
- Восходящая тонкослойная хроматография
- 1.4.5 Восходящая тонкослойная хроматография
- Нисходящая тонкослойная хроматография
- Горизонтальная тонкослойная хроматография
- Радиальная тонкослойная хроматография.
- 1.4.8 Радиальная тонкослойная хроматография
- 1.4.9 Сушка пластин
- 1.4.10 Идентификация разделенных веществ
- 1.4.11 Физические методы
- 1.4.12 Значение Rf
- 1.4.13 Цветные реакции
- 1.4.14 Сравнение со свидетелем
- 1.4.15 Физико-химические методы идентификации
- 1.4.16 Методы количественного анализа
- 1.4.17 Способы проведения тсх
- Глава 2. Контроль качества пищевых продуктов посредством метода ТСХ
- 2.1 Определение ддт, ддэ, ддд, альдрина, дильдрина, гептахлора, кельтана, метоксихлора, эфирсульфоната и других ядохимикатов в продуктах питания хроматографией в тонком слое
- Тонкослойная хроматография (тсх)
- Контроль за содержанием пищевых добавок в продуктах питания
- 1.6. Хроматографические методы разделения и анализа пищевых продуктов
- Тонкослойная хроматография
- Бумажная и тонкослойная хроматография. Применение.
- Тонкослойная хроматография
- 3.1. Тонкослойная хроматография
- Тонкослойная хроматография
- Тонкослойная хроматография. Достоинства и недостатки
- Методы определения микотоксинов и контроль за загрязнением пищевых продуктов